TMB顯色液(沉淀型，組化或膜HRP顯色用)
TMB
Color Development Solution for IHC or Blotting
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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包裝
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TM1026
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TMB顯色液(沉淀型，組化或膜HRP顯色用)
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100ml
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說明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡介：
TMB，即 3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根過氧化物酶（HRP）的常用底物。在辣根過氧化物酶或其他適當(dāng)過氧化物酶的催化下，TMB 會產(chǎn)生藍色產(chǎn)物。TMB 顯色液（沉淀型，組化或膜HRP顯色用，TMB Color
Development Solution for IHC or Blotting）采用最新的單一溶液的 TMB 顯色技術(shù)，用于 Western 或免疫組化等 HRP的顯色檢測，簡化了操作步驟，并且使檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。本顯色液具有高靈敏性，與 HRP反應(yīng)后產(chǎn)生藍紫色沉淀，沉淀吸附于印跡膜上，不會脫落，方便顯色結(jié)果的保存和觀察。
? 本試劑盒主要適用于免疫組化或原位雜交時HRP的顯色檢測，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜顯色檢測；本顯色液也可以用于原位檢測細胞或組織內(nèi)源性的過氧化物酶。由于產(chǎn)生的是沉淀型藍色產(chǎn)物，不適用于ELISA檢測。
? 用于免疫組化檢測時，如果每個樣品的顯色液用量為0.1ml，則可以檢測1000個樣品；對于膜的顯色檢測，如果每次使用2.5 ml顯色液，則可以檢測40次。
● 保存條件：
2-8℃避光保存；一年有效。
● 使用說明：
? 如果發(fā)現(xiàn)TMB顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍色，應(yīng)該停止使用。
一. 免疫組化檢測：
1. 參考免疫組化的實驗步驟，在與辣根過氧化物酶標記的抗體孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
2. 洗滌完畢后，去除洗滌液，滴加約100微升TMB顯色液。
3. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間(可在濕盒中顯色過夜)，直至顯色至預(yù)期深淺。
4. 去除染色液，加入重蒸水孵育10分鐘以終止反應(yīng)。
5. 拍照記錄或適當(dāng)封片后拍照記錄。如果有必要，可以使用中性紅染色液進行復(fù)染后再進行拍照記錄或適當(dāng)封片后拍照記錄。
二. 膜的HRP顯色檢測：
1. 參考相應(yīng)的實驗步驟，在與辣根過氧化物酶標記的抗體孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次5分鐘左右。
2. 洗滌完畢后，去除洗滌液，
3. 滴加約適量TMB顯色液充分覆蓋膜。
4. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間(可長達數(shù)小時)，直至顯色至預(yù)期深淺。
5. 直接拍照記錄。
● 常見問題：
一. 背景顯色太深。
1. 如果背景顯色太深，一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進行封閉，例如選購適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。另一方面，請選購經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。
2. 可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛?。另外，選擇適當(dāng)強度的洗滌液，或延長洗滌時間也會有所幫助。
二. 沒有顯色或顯色太弱。
1. 適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。在離心管內(nèi)用稀釋的二抗與染色液反應(yīng)，檢測二抗是否可以被正常顯色。
2. 可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。
3. 可以適當(dāng)延長顯色時間。
4. 如果上述改進不能獲得預(yù)期效果，對于免疫組化或Western，可以考慮更換效果更好的一抗；對于Southern、Northern或原位雜交，則可以考慮更換探針。
實驗示例：
樣品：K562細胞,SDS裂解液(Cat:RL1060)提取總蛋白；
電泳：4-20%RealPAGE Tris-Glycine預(yù)制膠(Cat:RTD6117-0420)
轉(zhuǎn)膜：RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液(Cat:RT5020),0.45μmPVDF膜，400 mA 30 min
封閉：Western封閉液I（BSA）（Cat：WB1070）常溫封閉60min
一抗：Anti-PCNA抗體（鼠單抗）（Cat：APM5012） 1:5000 RT 60min；
二抗：HRP標記羊抗鼠IgG（Cat：HGM1060） 1:5000 RT 60min；
顯色：TMB顯色液(沉淀型，組化或膜HRP顯色用)（Cat：TM1026），顯色1分鐘
使用TMB顯色液發(fā)表部分文章列表：
1. [2022 IF=9.22] A HCR based multivalent aptamer
amplifier for ultrasensitive detection of Salmonella.
Author: Mengni Sun, Na Ma, Hanxing Shi,
Ling-Zhi Cheong, Wenge Yang, Zhaohui Qiao
Product: TM1026 TMB顯色液(沉淀型，組化或膜HRP顯色用)
Journal: Sensors
and Actuators:B.Chemical 2023,375,132860
Institution：College of Food and Pharmaceutical Sciences,
Ningbo University
Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0925400522015039