2×CTAB提取緩沖液
● 產(chǎn)品編號及規(guī)格： Ver.740662
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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貯存
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RTG2405-200ml
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2×CTAB提取緩沖液
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200 ml
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RT
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還原劑
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1 ml
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RT
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RTG2405-500ml
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2×CTAB提取緩沖液
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500 ml
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RT
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還原劑
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1 ml
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RT
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● 產(chǎn)品介紹：
CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強(qiáng)度的溶液中(>0.7 M NaCl) CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物而不沉淀核酸。通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入醇（乙醇或異丙醇）沉淀即可使核酸分離出來。
2×CTAB提取緩沖液成分：2%(w/v，55
mM)CTAB，100 mM Tris (pH 8.0)，20
mM EDTA,1.4 MNaCl,，還原劑(隨用隨加) 。
● 儲存、運(yùn)輸及效期：
常溫貯存；常溫運(yùn)輸；有效期2年。
注：環(huán)境溫度低于15℃時(shí)，溶液會有結(jié)晶，37℃徹底溶化后使用。
● 實(shí)驗(yàn)操作步驟：
一 DNA提?。?span>
1.1 2×即用型CTAB提取液配制：
按照終濃度0.2% （v/v）加入還原劑，如1 ml 2×CTAB提取緩沖液中加入2 μl還原劑。2×即用型CTAB提取液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。配好后65℃預(yù)熱后備用。
1.2 材料研磨：
取0.2-0.5克新鮮植物材料，于液氮中研磨成粉末。
1.3 樣品裂解：
按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例將粉末轉(zhuǎn)入1.5
ml離心管中，立即加入65℃預(yù)熱的2×即用型CTAB提取緩沖液，65℃水浴30分鐘，間歇混勻。
注：提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml，否則后續(xù)純化不能在一個(gè)離心管內(nèi)完成；CTAB溶液在低于15℃時(shí)會形成沉淀析出，因此，在將其加入冰冷的植物材料之前必須預(yù)熱，且離心時(shí)溫度不要低于15℃。
1.4 離心去雜質(zhì)：
14000 g 常溫離心5分鐘，轉(zhuǎn)移上清至新的1.5 ml離心管中。
1.5去除RNA：
上清中加入1/100上清體積的RNaseA溶液（10
mg/ml）（貨號：RN001），如500
μl上清中加如5 μl RNaseA溶液，37℃處理20分鐘。
1.6 第一次純化：
步驟1.5溶液中加入等體積的Tris酚:氯仿:異戊醇（25:24:1），輕緩顛倒離心管混勻8-10次，常溫14000 g 離心10分鐘，小心吸取上清到一干凈1.5
ml離心管中，不要觸及下層。
1.7 第二次純化：
上清中加入等體積氯仿:異戊醇（24:1），顛倒離心管混勻8-10次，常溫14000 g離心10分鐘，保留上層水相。
1.8 沉淀DNA：
將上層水相轉(zhuǎn)入新的1.5 ml離心管中，加入0.6倍體積的冰冷異丙醇，輕柔混勻，-20℃靜
置30分鐘；14000
g4℃離心10分鐘。
1.9 漂洗DNA：
1.9.1
去上清液, 加入1ml
70%乙醇漂洗沉淀，4℃14000 g 3分鐘，吸棄乙醇。
1.9.2 4℃ 14000 g 1分鐘，用移液器吸盡殘余乙醇，超凈臺吹干沉淀。
注：沉淀不能徹底干燥，否則不好溶解。
1.10 貯存DNA：
加入50-100
μl的超純水或TE緩沖液溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?
二 RNA提?。?span>
注：以下程序請注意所有試劑都要保證RNase-free。
2.1 2×即用型CTAB提取液（RNase-free，現(xiàn)用現(xiàn)配）配制：
2×CTAB提取緩沖液中按照1/1000體積加入DEPC，如100 ml中加入100
μl DEPC，混勻后過夜處理，隨后高溫高壓，即為2×即用型CTAB提取緩沖液（RNase-free）。按照終濃度1 % （v/v）加入還原劑，如1 ml 2×CTAB提取緩沖液（RNase-free）中加入10 μl還原劑。2×即用型CTAB提取液建議現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后65℃預(yù)熱備用。
2.2 材料研磨：
取0.2-0.5克新鮮植物材料，于液氮中研磨成粉末。
2.3 樣品裂解：
按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例將粉末轉(zhuǎn)入1.5
ml離心管中，立即加入65℃預(yù)熱的2×即用型CTAB提取緩沖液，65℃水浴30分鐘，間歇混勻。
注：提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml，否則后續(xù)純化不能在一個(gè)離心管內(nèi)完成；CTAB溶液在低于15℃時(shí)會形成沉淀析出，因此，在將其加入冰冷的植物材料之前必須預(yù)熱，且離心時(shí)溫度不要低于15℃。
2.4 離心去雜質(zhì)：
14000 g 常溫離心5分鐘，轉(zhuǎn)移上清至新的1.5 ml離心管中。
2.5 第一次純化：
上清中加入等體積的水酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），輕緩顛倒離心管混勻8-10次，常溫14000 g 離心10分鐘。
2.6 第二次純化：
將上清液轉(zhuǎn)入另一1.5 ml離心管中，加入等體積氯仿：異戊醇（24：1），顛倒離心管混勻8-10次，常溫14000 g離心10分鐘。
2.7 沉淀RNA：
將上層水相轉(zhuǎn)入新的1.5 ml離心管中，加入1/2體積7.5 M LiCl溶液（RNase-free）（貨號：LC1030），輕柔混勻，-20℃ 靜置30分鐘；14000
g4℃離心10分鐘。
2.8 漂洗RNA：
2.8.1 去上清液, 沉淀中加入1ml
70%乙醇（RNase-free），吹打漂洗沉淀，14000 g4℃3分鐘，吸棄乙醇。
2.8.2 14000 g4℃1分鐘，用移液器吸盡殘余乙醇，超凈臺吹干沉淀。
注：RNA沉淀不能過分干燥，否則不好溶解。
2.9 貯存RNA：
加入50-100
μl的RNase-free水溶解RNA，-80℃保存?zhèn)溆谩?
使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1. [IF=4.35] Combined Effect of High-Pressure Processing with Spice Extracts on Quality of Low-Salt Sausage during Refrigerated Storage.
Author:Qing Xiao, Mei Xu, Baocai Xu, Conggui Chen, Jieying Deng and Peijun Li
Journal: Foods. 2021, 10, 2610.
Institution：Hefei University of Technology
Paper link：https://www.mdpi.com/2304-8158/10/11/2610
2. [IF=3.579] Effect of Lactobacillus plantarum andStaphylococcus xylosus on flavour development and bacterial communities in Chinese dry fermented sausages.
Author: YaqingXiao,PeijunLi
Journal: Food Research International. 2020.
Institution：Hefei University of Technology
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109247